3) Осветление с помощью яичного белка для сред, которые при варке мутнеют или темнеют.
4) Фильтрация жидких и расплавленных сред через ватно-марлевый фильтр или путём отстаивания.
5) Розлив сред по пробиркам, флаконам, колбам и т.п.
6) Стерилизация зависит от состава среды и проводится в автоклавах, на водных банях или в свертывателе Коха (это металлический цилиндр, обшитый снаружи материалом (линолеум, асбест), плохо проводящим тепло. На дно наливают воду, а стерилизующий материал помещают сверху на подставку. Аппарат закрывают конической крышкой, в которой имеются отверстия для термометра и выхода пара. Внизу расположен кран для спуска воды. Стерилизацию проводят текучим паром при 100 °С в течение 30-60 мин. При таком режиме погибают вегетативные клетки спорообразующих и неспорообразующих форм микробов. В аппарате Коха стерилизуют те материалы, которые не выдерживают температуру выше 100 °С (желатин, молоко, углеводные среды и др.).
Белковые среды и сыворотку крови, не переносящие температуру 100 °С, стерилизуют дробно при 56-58 °С в водяной бане).
7) Контроль проводится с целью подтверждения стерильности и оптимальности рH.
Алгоритм приготовления простых питательных сред:
1) Мясопептонный бульон (МПБ):
А) К мясной воде «+» 1% пептон, 0.5 частей NaCl.
Б) Кипятят на слабом огне 10-15 минут до растворения веществ.
В) Оптимизируют рH, снова кипятят 30-40 минут, до выпадения осадка.
Г) Фильтруют, доливают до первоначально объема водой.
Д) Стерилизуют 20 минут при 120°С.
2) Мясопептонный агар (МПА):
А) К МПБ до или после стерилизации»+» 2-3% измельченного агар-агара.
Б) Кипятят, помешивая на слабом огне до полного расплавления агара. Можно варить в аппарате Коха или в автоклаве.
В) При необходимости готовую среду осветляют (яичный желток).
Г) Фильтруют, стерилизуют 20 минут при 120°С.
3) Желатиновый столбик – простая среда, в пробирке нужна для определения протеолитических свойств бактерий (расщепление белка). Разжижение желатина – протеолитическая активности.
4) Хромотогеные среды (ХС)– питательные среды, позволяющие по окраске колонии делать предварительные заключения о виде выделенного м.о.
Принцип действия ХС– реактивы в составе среды, взаимодействуют с ферментами м.о. специфичными только для этого вида с образованием окрашенных веществ.
Алгоритмы приготовления сложных питательных сред:
1) Среда с углеводами:
А) Сахарный бульон (СБ)– сложная жидкая питательная среда:
1) К МПБ нейтральной реакции «+» 0.25-2% глюкозы (растворяют в небольшом количестве дистиллированной воде).
2)Стерилизуют три дня подряд по 30 мин или однократно в автоклаве при 115°С 30 мин.
Б) Сахарный агар (СА) – сложная плотная питательная среда:
1) КМПА «+» 0.5-2% глюкозы (растворяют в небольшом количестве дистиллированной воде).
2) Стерилизуют три дня подряд по 30 мин или однократно в автоклаве при 115°С 15 мин.
2) Дифференциально –диагностические среды– предназначены ля определения ферментативной активности культур бактерий, это плотные питательные среды или полужидкие по консистенции, содержащие субстрат индикатор, позволяющий по изменению цвета судить о наличие у бактерий исследуемой культуры ферментов для расщепления субстрата.
А) Среда Эндо– среда для выделения энтеробактерий ( группа бактерий, которые вызывают инфекции ЖКТ и др органов):
1)100 мл МПА рH=7.4 расплавляют на водяной бане или в текучепаровом аппарате.
2) Охлаждают до 70°С и «+» 1 грамм лактозы (предварительно растворяют в воде).
3) В отдельной пробирке готовят 2-3 мл насыщенного раствора фуксина.
Конец ознакомительного фрагмента.